农杆菌的培养方法

1、首先，从LB固体平板上.挑取含有目的基因的单菌落，接种到3 ml LB液体培养基中[ 含利福平(30 mg L)、卡那霉素(70mg/L)和四环素(6.5mg/L) ]于恒温揭床上,27C，以180 r/min 的转速振荡培养过夜，至AOC为0.6~0.8。

3、然后侵染，于超净工作台上，将菌液倒入无菌的小培养皿中。取不具Kan 抗性的烟草无菌苗的幼嫩、健壮叶片，去主脉，将叶片剪成0.5 cm2的小块，放人菌液中,浸泡5~10min。取出叶片置于无菌滤纸上吸去附着的菌液，同时设未经农杆菌侵染的叶盘作为阴性对照，以下步骤同。

5、然后，进行选择培养，将黑暗中共培养2~4 d的烟草叶片转移到筛选培养基(T2)中,用封口膜封好培养皿，在光照为2 000~10 000 lx.25~28'C.16/8 h(day/荏鱿胫协night) 光暗条件下选择培养， a 盘边缘轻压人培养基中，以增加选择压力。